质粒大量提取试剂盒

质粒大量提取试剂盒

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◆质粒大量提取试剂盒目录号PL11使用手册实验室使用，

仅用于体外

质粒大量提取试剂盒

质粒大量提取试剂盒（离心柱型）

目录号：PL11

目录编号PL1101包装单位10次

适用范围：

适用于大规模高纯度质粒制备 试剂盒组成、储存、稳定性：

保存

－20℃

4℃

室温

室温

室温

室温

室温

室温试剂盒组成RNaseA（10mg/ml）溶液P1溶液P2溶液P3漂洗液WB洗脱缓冲液EB吸附柱DC收集管（50ml）10次µl750750µ75ml75ml110ml50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇20ml10个10个

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

质粒大量提取试剂盒

储存事项:

1.μg/ml）第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNaseA加入溶液P1后（终浓度100100μ

置于4℃保存。如果溶液P1中RNaseA失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNaseA即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热

几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时

盖紧盖子。

产品介绍：

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

1.产品特点：离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附

量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、方便，从

100-200ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80%左右。

3.获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、

体外转录、测序等各种分子生物学实验。

质粒大量提取试剂盒

1.注意事项所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达12,000xg，带50ml

转头的台式离心机。

2.溶液P3中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝

质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液应在70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，提高提取效率。

4.得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260

值为1相当于大约50μg/mlDNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。

5.质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。

处于环状或者超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。

6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗

脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，质粒应该保存－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

质粒大量提取试剂盒

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：

第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

将RNaseA全部加入溶液P1中，混匀。每次使用后置于2-8℃保存。

将溶液P3放在冰上预冷。

1.取150-200毫升过夜培养的菌液，12,000xg，离心1-2分钟，尽可能的倒干上清，

收集菌体。

收集超过50毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个50ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。

2.用7ml溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。

如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

3.加7ml的溶液P2，温和地上下翻转4-7次使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。

温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

4.加10ml溶液P3，立即温和地上下翻转4-7次，充分混匀此时会出现白色絮状沉

淀。室温或者冰上静置5分钟，4℃，12,000xg离心15分钟，小心取上清，避免吸取到漂浮的白色沉淀。

加入溶液P3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀，如果上清中还有飘浮白色沉淀，可再次离心后取上清。

5.

6.可选（一般不需要做）:4℃，12,000xg再次离心10分钟，小心取上清。将 …… 此处隐藏：1710字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……