抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

制备抗人FXYD3单克隆抗体(McAb)并鉴定其生物学特性,以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHH—PGETPPLITPGSA。获得四株可稳定分泌抗人FXYD3McAb的杂

第 1卷 1

第2 5期

2 1年 9月 01

科

学

技

术

与

工

程

Vo .1 No 2 S p. 2 1 1 1 .5 e 01

17— 1 1 (0 1 2—0 90 6 1 8 5 2 1 ) 5 6 1—5

S in e T c n lg n n i e r g ce c e h oo y a d E g n ei n

⑥

2 1 SiT c. nr. 0 1 c. eh E gg

抗人 F Y 3单克隆抗体的制备与初步鉴定 X D马焕先高丽杰张爱群周宁新(放军总医院肝胆外科。北京 10 5解放军总医院野战外科研究所 北京 10 5;二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所，京 10 8 )解， 0 83;, 083第北 00 8

摘

要

制备抗人 F Y 3单克隆抗体 ( c b并鉴定其生物学特性， X D MA )以固相合成法获得的 F Y 3合成多肽与载体蛋白K H X D L

偶联后免疫 B L/ A B c小鼠，用杂交瘤技术制备抗人 F Y 3 Mc b采 X D A。用 E IA、 s r l、 LS Wet n Bo免疫组化技术对抗人 F Y 3 e t X DMc b的亚型、 A效价、亲和力及特异性进行鉴定。筛选出两段较好的优势抗原表位，别为 ND E K S F分 L D N P Y和 K G K G— F Q S HHP E P LT G A获得四株可稳定分泌抗人 F Y 3M A G T P IP S。 X D c b的杂交瘤细胞株 0 A1C 0 F E、2 6 1 2 2 A、2 1 8 0 E B 0与 0 A 0 1,型鉴 3 1E 1亚

定重链均为 I, g轻链为 kp a G1 ap链。间接 E IA法测定效价均在为 1 0 LS:1以上。其中0 F E 2 1 8效价为 1 0:1以上，亲和常数为 3 1 L o。免疫组化分析显示了F Y 3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌 B p - .1x1/m l 0 X D xe3细胞系细胞的胞膜上。结果成功制备了四株抗人 F Y 3Mc b其中0 F E X D A, 2 1 8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究 F Y 3在肿瘤组织及细胞系中的表 X D达及临床意义奠定了基础。

关键词离子通道调节子

FY 3 X D

杂交瘤细胞

单克隆抗体

中图法分类号

R9 .; 3 2 4

文献标志码

B

近年来小分子单跨膜蛋白在细胞水平的重要

关系奠定基础。

调节作用逐渐得以认识及进一步深入的研究。其

中F Y X D蛋白是新近研究的焦点。F Y X D家族具有

1材料与方法1 1材料 .

由3 5个氨基酸组成的信号序列，包含位于跨膜区周围的 7个恒定氨基酸以及信号序列始端恒定的基序P X D(氨酸一丙氨酸一一氨酸-冬氨酸 ) FY脯苯 x酪天。 S e d e与 R e…于 2 0 w a nr al 0 0年根据 F Y X D基序及其结构特点将 F Y X D家族进行了界定。F Y 3 MA . X D ( T 8,乳腺肿瘤标志物 )以其独特的双跨膜结构区域 区别于家族其他成员。Big r s g W.Mor o等学者 r sn i研究发现 F Y 3可能是 cn u或 vH r癌基因转 X D .e— aa s化所必需的组成部分， rml认为 F Y 3蛋白与 Gz i等 X D细胞增殖和抗增殖过程有关 J因此利用 F Y 3。 X D ( 8周雌性 B L/小鼠由解放军总医院实 6~ ) A Bc

验动物中心提供，P/ S 2 0骨髓瘤细胞由北京赛驰生物有限公司提供，胰腺癌细胞系 B P一 3购自上人 xc海中科院细胞所，腺癌组织来自解放军总医院普乳通外科手术标本，氏完全佐剂及弗氏不完全佐剂弗 ( I C R, 0×HA及 10×H培养基 G B O B L) 10 T 0 T( I C R, P - 14培养基 ( I C一 G B O B L) R MI 6 0 GB 0

B L,根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IG抗体， R )辣 g酶标二抗 (京中杉金桥有限公司 )匙孔虫戚血蓝蛋北，白( L交联试剂盒 ( i a,体亚类鉴定试剂 K H) Sg )抗 m ( h r ai) 9 P am c,6孔酶标板，4孔细胞培养板 ( i— a 2 Bo R d,标仪 ( hr o e c o o oai S . a)酶 T em l t n cr rt n U A) er p oPoe e h rs和层析柱 ( h r a i) rt nG S p aoe亲 i P am c。 a1 2方法 .

单克隆抗体研究其在消化系统肿瘤组织的表达情况及临床意义显得尤为重要。本课题组采用杂交

瘤技术制备抗人 F Y 3单克隆抗体， X D并对其生物学特性进行初步鉴定，为进一步研究 F Y 3与肿瘤的 X D2 1 5月 2 0 1年 0日收到， 3 5月 1日修改

第一作者简介：马焕先 (

9 0 )女， 18~,汉族，山西河曲人，士。E博—mal h n a 0@ s h . o i:s a i 8 o u c m。

1 2 1抗原表位的分析与多肽合成 ..根据 H m a i sF Y 3 B 0 5 3 . G: o o spe X D ( C 0 2 8 1 I n

通讯作者简介：宁新。 Ema: o n3 1 13 cm。周 . i z ux0@ 6 .o lh