农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体(4)

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植物遗传资源学报13卷

子叶节区的GUS染色结果见图2，其中在子叶节区出现蓝色的为阳性外植体，表明GUS基因在子叶节A、B、C和D）。图2E为非区进行了瞬时表达（图2，转基因的阴性对照。

77由表2可以看出，侵染液中不添加SilwetL-

且蔗糖浓度为3%时GUS阳性率达到44.05%，显

著高于其他处理。对丛生芽得率的统计结果与GUS染色的统计结果一致（表3），即侵染液中不添

77、同时附加3%的蔗糖时其丛生芽得率加SilwetL-最高，达到了60.40%

。

图1农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体系的操作及获得的转基因植株Fig.1

OperationandthetransgenicplantsoftheAgrobacterium-mediated

genetictransformationsystemofsoybeancotyledonarynodewithnontissue-culture

A：大豆种子土培萌发5d；B：切取子叶节外植体，圆圈和箭头分别表示子叶节区和刀痕；C：套黑塑料袋共培养3d；D：共培养结束后外植体状态；E：套白塑料袋保湿进行芽诱导；F：诱导10d后丛生芽的状态，箭头表示丛生芽；

G：丛生芽生长10d后的状态；H：转化后3～4个月获得的转基因T0植株

A：Soybeanseedsgerminatedinsandysoilfor5days；B：Cotyledonarynodeexplant．Thecircleandarrowindicatetheregionofacotyledonarynodeandthewoundbyascalpel，respectively；C：Co-cultivationfor3daysbycoveringtheblackplasticbag；

D：Explantsafterco-cultivation；E：Multipleshootsinducedwithcoveringthewhiteplasticbagtokeepmoisture；

F：Multipleshootsinducedfor10days；G：Multipleshootselongatedfor10days；

H：T0transgenicplantsaftertransformationfor3-4

months

图2

Fig.2

GUS基因在子叶节区的瞬时表达

TransientexpressionofGUSgeneintheregionofcotyledonarynode

A-D：GUS染色阳性外植体；E：阴性对照（16×）A-D：GUSstainingpositiveexplants；E：negativecontrol（16×）