标准的免疫荧光染色步骤

这是针对细胞爬片的免疫荧光染色标准步骤：

1）实验前一天，将细胞接入铺有22×22mm（或24×24mm）盖玻片的六孔板中。

2）第二天，待细胞汇合度达到70％左右开始进行染色步骤。

3）用新鲜配制的2％（或4％）多聚甲醛固定细胞10分钟。

4）PBS洗三遍，每次5分钟。

5）用0.2-0.5％ triton X-100（PBS配制）对细胞透化处理10分钟。

6）PBS洗三遍，每次5分钟。

7）2％BSA或者10％二抗同源血清（注意一定要是正常血清）封闭30分钟，PBS洗两遍。

8）加入1抗，室温孵育1 小时。

9）PBS洗三遍，每次5分钟。

10）加入二抗，室温孵育30-45 分钟。

11）PBS洗四遍，每次5分钟。

12）加入0.5 ug/ml DAPI（PBS配制）染色10分钟（这里也可用其它的染核染料如hoechst 33258）。

13）用PBS洗三遍，去除多余的DAPI。

14）加入20 ul封片剂封片。

15）封片好的细胞样品可于4度冰箱中存放2周以上。

注意步骤5-7在某些蛋白的染色步骤中可能不是必须的，一抗如果有多种（但注意要是不同种属的）可以同时孵育，二抗同时使用时最好是同一种属来源（如驴抗兔，驴抗羊，驴抗鼠），以避免二抗间的交叉反应。

如果是组织切片样品，可能还涉及到样品的染色前处理（比如石蜡切片的脱蜡），请参阅其它的说明，但荧光染色步骤是一样的。