免疫组化操作步骤

免疫组化操作流程

试剂准备

1. PBS缓冲液（pH7.2～7.4）： NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。

2. 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。即抗原修复液

3.PBST: PBS+吐温-20（1000:1）洗液可全部运用PBST

4. 3% 甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。

5. 封片剂：中性树脂+二甲苯。

操作流程

免疫组织化学染色

SP法：

1. 脱蜡、水化：

脱蜡前，应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟，观察石蜡应溶解。

从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟，更换二甲苯后再浸泡30分钟；

无水乙醇中浸泡3分钟；

95%乙醇中浸泡3分钟；

70%乙醇中浸泡3分钟（我用80%）；

50%乙醇中浸泡3分钟；

自来水中浸泡3分钟；