文档分类
基因敲除的实验过程
1、在把基因序列中寻找NGG序列获得其附近20多个碱基的序列,与tracrRNA序列融合,设计出sgRNA并合成该序列。
2、将该序列以及cas9基因连入如图所示载体。
3、转化感受态,质粒小提,测序验证。
4、细胞培养与细胞转染
5、敲除效果检测。
6、建立稳定敲除的细胞株
Cas9质粒构建