结核杆菌TBPCR荧光扩增检测说明书(3)

干至无明显液滴为止），沉淀中加入1ml灭菌生理盐

水，振荡悬浮（注意：按紧离心管盖后，横向按在旋

涡振荡器上将沉淀振起），13,000rpm离心10min。

1.5. 弃上清，用1ml灭菌生理盐水洗涤沉淀，

13,000rpm离心10min。

1.6. 弃上清，向沉淀中加入DNA提取液30ul，振荡

混匀，2,000rpm离心5sec，放37℃温浴30min，再放

入100℃水浴/干浴10min，13,000rpm离心10min，保

留上清备用。（如果样本裂解产物当天不使用，请于

-20℃保存。）

2．扩增试剂准备（PCR前准备区）从试剂盒中取出

TB PCR反应液、Taq酶及UNG，室温融化并振荡混

匀后，2,000rpm离心10sec。设所需要的PCR反应管

管数为n（n=样本数+1管阴性对照+1管强阳性对照+1

管临界阳性对照），每个测试反应体系配制如下表： ※

※ 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积离心管

中，充分混合均匀，2,000rpm离心10sec，向设定的n

个PCR反应管中分别加入相应体积的反应液（40ul

体系加入38ul，20ul体系加入18ul），转移至样本处

理区。

3．加样（样本处理区）若样本裂解产物保存在-20℃,